改良苯.酚品紅染色

改良苯.酚品紅染色

二、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1、取材：查閱相關(guān)植物對(duì)應(yīng)的根尖分裂旺盛期，在此期間剪取新生根尖約2-3cm，純水稍洗凈。

　　2、預(yù)處理：用秋水仙素或者8-羥基喹啉預(yù)處理或者置于純水中4℃處理約24h(選做)。

　　3、固定：取出根尖置于卡諾氏固定液(無(wú)水乙醇：冰醋酸=3:1混勻)中4℃固定約1-4h，轉(zhuǎn)移根尖至75%的乙醇中保存;

　　4、低滲：取出根尖純水稍洗2遍，置于純水中浸泡約30min;

　　5、解離：取出根尖置于1M HCL溶液中60℃處理10-30min，純水洗2遍，置于純水中浸泡約30min;

　　6、取材染色：將根尖用純水清洗2遍后置于載玻片上，切取根尖分生區(qū)并撥散，組畫(huà)筆畫(huà)圈，晾干或者稍烤干分生區(qū)組織細(xì)胞，滴加改良苯.酚品紅染液染色15-35min;

　　7、壓片：直接用染色液封片，稍吸除多余的染色液，蓋玻片上覆蓋濾紙，用橡皮擦或者手指平整地按壓玻片進(jìn)行壓片，分散染色體;

　　8、封片：將制好的玻片放置-20℃下冰凍約10min，取出后用刀片從蓋玻片一角迅速撬開(kāi)，晾干或烤干載玻片和蓋玻片，甘油明膠或中性樹(shù)膠封片。

　　9、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

　　三、結(jié)果判讀：

　　染色體呈深的紫紅色，背景淺的紫紅色或者無(wú)色。

　　四、注意事項(xiàng)：

　　1、若固定后的根尖暫時(shí)不使用，保存在75%的乙醇中，下次使用前需要再次固定，4℃條件下約4h。

　　2、壓片過(guò)程中，防止蓋玻片移動(dòng)或者破裂，得到數(shù)量清晰的染色體，此步驟操作較難成功。

　　3、改良苯.酚品紅染色液陰涼通風(fēng)處可保存1年不變質(zhì)。