掃描電鏡SEM檢測(cè)服務(wù)

一、掃描電鏡SEM檢測(cè)服務(wù)的制樣步驟：

（1）取材固定：新鮮組織確定取材部位，盡量減小牽拉、挫傷與擠壓等機(jī)械損傷，1-3min內(nèi)取樣，組織塊面積不超過(guò)3mm2，用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污，毛發(fā)等去掉，保護(hù)好需要掃描的面并做好標(biāo)記（如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理）。迅速投入電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存。

（2）貼壁細(xì)胞：貼壁于蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)處理完成后棄培養(yǎng)基，用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存。注意保護(hù)好掃描面避免劇烈震蕩細(xì)胞脫落。

（3）后固定：固定好的樣品經(jīng)0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）配制1%鋨酸室溫避光固定1-2h。0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。

（4）脫水：組織依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精每次15min,乙酸異戊酯 15min。

（5）干燥：將樣本放入臨界點(diǎn)干燥儀內(nèi)進(jìn)行干燥。（干燥的樣品及無(wú)機(jī)材料不需要以上步驟）


（6）樣本導(dǎo)電處理：將樣本緊貼于導(dǎo)電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺(tái)上進(jìn)行噴金30s左右。

（7）掃描電子顯微鏡下觀察采圖。

二、掃描電鏡SEM檢測(cè)服務(wù)樣本準(zhǔn)備方法及要求：
1、動(dòng)植物組織樣本：
① 1-3min內(nèi)取樣，組織塊不超過(guò)3mm2，用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污，毛發(fā)等去掉，將需要掃描的面做好標(biāo)記（如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理）。

② 取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。尤其是注意保護(hù)掃描面。

③ 組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

④ 植物樣本放入固定液后需抽氣沉底。

2、細(xì)胞樣本：
貼壁細(xì)胞：貼壁于蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)處理完成后棄培養(yǎng)基，用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞要肉眼可見(jiàn)細(xì)胞沉淀芝麻至綠豆大小，棄培養(yǎng)基后用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液并將細(xì)胞吹打開(kāi)懸浮于固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

3、細(xì)菌樣本：
長(zhǎng)于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌：連帶著培養(yǎng)基切下不超過(guò)3mm2組織塊，有細(xì)菌的一面作為掃描面，放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存， 4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)菌孢子等：離心收集細(xì)菌要肉眼可見(jiàn)細(xì)菌沉淀芝麻至綠豆大小，棄培養(yǎng)基后用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液并將細(xì)菌吹打開(kāi)懸浮于固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

4、其他如粉末狀材料：
直接準(zhǔn)備干燥的粉劑。帶有磁性的金屬材料（鐵，鈷，鎳等）不能做掃描電鏡。